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高效液相色譜法對色譜柱的要求

發(fā)布時(shí)間:2018-08-30發(fā)布者:高效液相色譜柱

  反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑,常用的高效液相色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠,以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用,辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠(如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等)也有使用。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑,常用的填充劑有硅膠等。離子交換色譜系統(tǒng)使用離子交換填充劑;分子排阻色譜系統(tǒng)使用凝膠或高分子多孔微球等填充劑;對映異構(gòu)體的分離通常使用手性填充劑。填充劑的性能(如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類型等)以及高效液相色譜柱的填充,直接影響供試品的保留行為和分離效果。分析分子量小于2000的化合物應(yīng)選擇孔徑在15nm(1nm=10A)以下的填料,分析分子量大于2000的化合物則應(yīng)選擇孔徑在30nm以上的填料。除另有規(guī)定外,普通分析柱的填充劑粒徑一般在3~10μm之間,粒徑更?。s2μm)的填充劑常用于填裝微徑柱(內(nèi)徑約2mm)。
  使用微徑柱時(shí),輸液泵的性能、進(jìn)樣體積、檢測池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配;如有必要,色譜條件也需作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對其測定結(jié)果產(chǎn)生爭議時(shí),應(yīng)以品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件的測定結(jié)果為準(zhǔn)。
  以硅膠為載體的鍵合固定相的使用溫度通常不超過40℃,為改善分離效果可適當(dāng)提高高效液相色譜柱的使用溫度,但不宜超過60℃。

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